Il differenza principale tra il test MTT e MTS è questo Il saggio MTT ha un passaggio aggiuntivo associato alla solubilizzazione dei cristalli di formazano mentre il saggio MTS non è associato alla solubilizzazione dei cristalli di formazano.

I test MTT e MTS sono due tipi di test utilizzati per misurare la vitalità cellulare in vitro. Aiutano a rivelare l'effetto delle molecole del test sulla proliferazione cellulare e sulla citotossicità, influenzando la vitalità cellulare. Inoltre, il test MTT richiede più tempo rispetto al test MTS.

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Cos'è il test MTT?

Il test MTT è il primo test di vitalità cellulare omogeneo sviluppato per un formato a 96 pozzetti adatto per lo screening ad alto rendimento (HTS). Il principio di questo saggio è determinare la vitalità cellulare in base alla capacità delle cellule di ridurre un colorante tetrazolio mediante l'azione dell'enzima, l'ossidoreduttasi cellulare NAD(P)H-dipendente, presente nelle cellule vitali. Qui, il colorante tetrazolio utilizzato per il dosaggio MTT è 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolio bromuro, che è di colore giallo. La suddetta azione enzimatica porta alla formazione di un prodotto formazano insolubile sotto forma di cristalli precipitati all'interno delle cellule e in prossimità della superficie cellulare e nel mezzo di coltura. Tuttavia, poiché la quantità di prodotto formazano viene misurata mediante la misurazione dell'assorbanza, i cristalli insolubili devono essere prima solubilizzati e quindi l'assorbanza può essere misurata a 570 nm.

Figura 1: reazione MTT

Tuttavia, sebbene il test MTT utilizzi meno materiali e passaggi, questo metodo presenta alcuni svantaggi. Il saggio non è adatto per sospendere le cellule. Inoltre, le proteine ​​precipitate ei detriti cellulari presenti nel campione possono interferire con la misurazione dell'assorbanza, riducendo la sensibilità e l'accuratezza del dosaggio. Inoltre, il tempo di analisi e il numero di cellule presenti nel campione devono essere ottimizzati per ogni tipo di cellula.

Cos'è il dosaggio MTS?

Il saggio MTS è un nuovo metodo per il saggio MTT poiché utilizza un nuovo tipo di colorante al tetrazolio, che alla fine si traduce in un prodotto di formazano acquoso e solubile. Qui, il colorante tetrazolio utilizzato nel dosaggio MTS è 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carbossimetossifenil)-2-(4-solfofenil)-2H-tetrazolio. La formazione del colorante formazano solubile avviene in presenza di fenazina metosolfato (PMS), che funge da accettore di elettroni intermedio, trasferendo elettroni dal NADH per ridurre il colorante tetrazolio, formando il prodotto formazano solubile.

Figura 2: Piastra MTT

La formazione diretta di un prodotto di formazano solubile riduce la fase di solubilizzazione del prodotto di formazano del saggio MTT. Pertanto, il test MTS è più efficiente e richiede meno tempo. Inoltre, rimuove potenziali errori come la perdita cellulare, che può verificarsi durante la rimozione del mezzo e la solubilizzazione del prodotto formazano. Inoltre, il prodotto formazan risultante è di colore più scuro; questo aumenta la sensibilità e l'accuratezza del saggio.

Somiglianze tra test MTT e MTS

Differenza tra dosaggio MTT e MTS

Definizione

Il test MTT si riferisce a un test colorimetrico per valutare l'attività metabolica cellulare mentre il test MTS si riferisce a un test MTT "one-step" che offre la comodità di aggiungere il reagente direttamente alla coltura cellulare senza i passaggi intermittenti richiesti nel test MTT. Quindi, questa è la principale differenza tra il test MTT e MTS.

Tipo di colorante di tetrazolio utilizzato nel dosaggio

Inoltre, mentre il saggio MTT utilizza MTT (3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolio bromuro), il saggio MTS utilizza MTS (3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-5 -(3-carbossimetossifenil)-2-(4-solfofenil)-2H-tetrazolio).

La solubilità del prodotto Formazan

Inoltre, il prodotto di formazan nel test MTT è insolubile mentre il prodotto di formazan nel test MTS è solubile. Quindi, questa è una differenza importante tra il test MTT e MTS.

Misura dell'assorbimento

Tempo

Anche il tempo è una differenza tra il test MTT e MTS. Il test MTS consuma meno tempo rispetto al test MTT.

Sensibilità e Precisione

Inoltre, il test MTT è meno sensibile e meno accurato poiché i detriti cellulari e le proteine ​​precipitate possono interferire con la misurazione dell'assorbanza mentre il test MTS è più sensibile e accurato a causa della formazione del prodotto di formazano più scuro.

Costo

Un'altra differenza tra il test MTT e MTS è il costo. Il test MTT è meno costoso del test MTS.

Conclusione

Il saggio MTT è un saggio classico per misurare la vitalità cellulare per valutare l'effetto delle molecole in esame sulla proliferazione cellulare e sulla citotossicità. Tuttavia, il prodotto formazano risultante nel saggio MTT è insolubile; quindi, questo saggio richiede un passaggio aggiuntivo per solubilizzare il prodotto di formazano. Al contrario, il test MTS è un nuovo metodo per misurare la vitalità cellulare e utilizza un nuovo tipo di sale di tetrazolio, che produce un formazano solubile, riducendo di un passaggio la procedura del test MTT. Pertanto, il test MTS è più efficiente rispetto al test MTT. Quindi, la principale differenza tra il test MTT e MTS sono le caratteristiche del prodotto formazan.

Riferimento:

1. Riss TL, Moravec RA, Niles AL, et al. Saggi di vitalità cellulare. 2013 maggio 1 [Aggiornato 2016 luglio 1]. In: Sittampalam GS, Coussens NP, Brimacombe K, et al., editori. Manuale di guida al dosaggio [Internet]. Bethesda (MD): Eli Lilly & Company e il National Center for Advancing Translational Sciences; 2004-.Disponibile qui.

Cortesia dell'immagine:

1. "Reazione MTT" di Rogan Grant - Opera propria (CC BY-SA 4.0) tramite Commons Wikimedia 2. "MTT Plate" di Shinryuu - Opera propria (dominio pubblico) tramite Commons Wikimedia